猪支原体肺炎的流行病学调查及血清学检测
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时间：2017-12-31
猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）是由猪肺炎支原体（Mycoplasmal hyopneumoniae，Mhp）引起的一种慢性、接触性传染病， 该病发病率高、死亡率低，是一种重要的免疫抑制性疾病， 也是猪呼吸道疾病综合征（Porcine respiratory disease complex，PRDC）的重要病原之一。因该病临床以气喘为主要特征，所以在我国又常被称为气喘病（或喘气病）[1]。
该病长期危害养猪业， 并广泛分布于世界各国。猪群中该病的感染率在90%以上，发病率极高，而且很难控制。除猪支原体肺炎外， 其他猪呼吸道疾病包括巴氏杆菌 、胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、猪链球菌、副猪嗜血杆菌以及猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流感病毒（SIV）、猪呼吸道冠状病毒（PRCV）引起的感染[2]。这些病原的长期存在严重威胁着养猪业的健康发展，使其饲料转化率降低，还可出现食欲减退、发热、咳嗽、呼吸困难等症状。因该病侵入初期主要呈慢性或隐性感染，猪只临床症状不明显或没有临床症状，不能及时发现和消除传染源，导致该病传染给其他易感猪群。当感染肺炎支原体没有并发感染时， 出现亚临床症状，表现温和， 不出现咳嗽，平均日增重降低和饲料转化率降低。当继发感染时，出现呼吸困难，发热等临床症状，有时也有死亡病例。该病一旦传入猪群很难彻底清除。因此，对该病流行病学的认识以及诊断技术的研究和应用具有十分重要的意义。
笔者主要在海口及周边市县的规模化猪场调查了自然发病的MPS病例的流行病学资料，并观察记录该病的临床表现和部分病理剖检变化，采集疑似该病的血清进一步检测诊断，以期为猪支原体肺炎的诊断提供更加可靠便捷的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
海南省海口市、屯昌县等市（县）部分猪场中自然感染MPS的病例，采集212份不同日龄阶段的猪只血清作为待检样品，血清样品来自3个规模化商品猪场，分别采集110份、48份、44份血清样品。所采血清样品猪场均未接种猪肺炎支原体疫苗。
血清学检测试剂盒：猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测试剂盒（深圳真瑞生物科技有限公司）；批号：2016112311；有效期：2017年11月23日。
操作方法及结果判定依据试剂盒说明书进行。S/P<0.2，判定为支原体肺炎血清抗体阴性；S/P>0.4判定为支原体肺炎血清抗体阳性；S/P在0.2～0.4之间，判为支原体肺炎血清抗体可疑。
1.2 流行病学调查
主要通过深入发病猪场和部分散养村组调查，以及与养殖场兽医、技术员和散养户群众电话、座谈等方法，对自然感染猪支原体肺炎的发病地区进行疫情来源及流行情况调查分析，包括发病的数量、年龄及感染率、发病率、病死率等内容，并根据疫病流行可能的传播途径和方式、猪群的饲养管理方法等，详细了解和掌握猪支原体肺炎流行的基本情况。
1.3 典型病例的临床诊断
选择临床症状比较典型的病例，观察其个体及群体发病的具体临床表现，如猪的体温，呼吸次数，早晚的呼吸咳嗽情况等，并进行详细的文字记录。
1.4 血清学诊断（酶联免疫吸附试验）
血清学抗体诊断用于监测猪群的健康状况，用已知特异性猪肺炎支原体抗原检测猪只血清中特异性抗体，通过比较动物不同年龄和不同生产周期血清中抗体效价的变化或特异性抗体有无，来判断是否存在病原体感染或检测免疫效果。经研究酶联免疫吸附试验是猪肺炎支原體血清学试验中抗体检测最敏感的试验方法，故本实验选择此方法进行鉴定[3]。
对未接种过猪肺炎支原体疫苗的种猪场，采集症状较明显的猪只血清进行酶联免疫吸附试验（ELISA）。
2 结果与分析
2.1 流行病学调查结果
笔者对海口市、文昌市、屯昌县的3个大型猪场和部分养殖户进行了猪支原体肺炎的流行病学资料调查，通过临床观察、病理剖检及血清学检测等方法确诊为猪支原体肺炎。
结果发现，不同年龄、品种和性别的猪都可能感染该病，育肥猪感染率在93.3%及以上。其中以哺乳仔猪和幼龄猪的发病率最高，高达62%和57%。其次是妊娠后期的母猪和哺乳母猪，发病率为28%，育肥猪和种猪、后备猪发病率最低，多呈隐性感染。不表现出明显的临床症状。但通过血清学检测可检测到阳性。
由于海南尤其海口附近地区的气候潮湿等原因，该病发病率相比其他地区更高。该病一年四季均有发生，尤其是在寒冷、多雨、潮湿及气候骤变时较为多见。此时的发病率会明显增高，甚至引起大批发病和急性死亡。特别是高密度饲养的集约化猪场，该病发生率更高，一旦发病，就会引起大面积传播，造成较大的经济损失。
2.2 临床特征
临床症状比较明显的病例主要是哺乳期仔猪，呈急性发作，表现为精神不振，头下垂，独立一隅或趴于地面，呼吸次数剧增至90次/min以上，病猪呼吸困难，严重者张口呼吸，并发出喘鸣音，呈明显的腹式呼吸。咳嗽次数少而低沉，偶尔会有痉挛性咳嗽的症状。
该病长期危害养猪业， 并广泛分布于世界各国。猪群中该病的感染率在90%以上，发病率极高，而且很难控制。除猪支原体肺炎外， 其他猪呼吸道疾病包括巴氏杆菌 、胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、猪链球菌、副猪嗜血杆菌以及猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流感病毒（SIV）、猪呼吸道冠状病毒（PRCV）引起的感染[2]。这些病原的长期存在严重威胁着养猪业的健康发展，使其饲料转化率降低，还可出现食欲减退、发热、咳嗽、呼吸困难等症状。因该病侵入初期主要呈慢性或隐性感染，猪只临床症状不明显或没有临床症状，不能及时发现和消除传染源，导致该病传染给其他易感猪群。当感染肺炎支原体没有并发感染时， 出现亚临床症状，表现温和， 不出现咳嗽，平均日增重降低和饲料转化率降低。当继发感染时，出现呼吸困难，发热等临床症状，有时也有死亡病例。该病一旦传入猪群很难彻底清除。因此，对该病流行病学的认识以及诊断技术的研究和应用具有十分重要的意义。
笔者主要在海口及周边市县的规模化猪场调查了自然发病的MPS病例的流行病学资料，并观察记录该病的临床表现和部分病理剖检变化，采集疑似该病的血清进一步检测诊断，以期为猪支原体肺炎的诊断提供更加可靠便捷的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
海南省海口市、屯昌县等市（县）部分猪场中自然感染MPS的病例，采集212份不同日龄阶段的猪只血清作为待检样品，血清样品来自3个规模化商品猪场，分别采集110份、48份、44份血清样品。所采血清样品猪场均未接种猪肺炎支原体疫苗。
血清学检测试剂盒：猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测试剂盒（深圳真瑞生物科技有限公司）；批号：2016112311；有效期：2017年11月23日。
操作方法及结果判定依据试剂盒说明书进行。S/P<0.2，判定为支原体肺炎血清抗体阴性；S/P>0.4判定为支原体肺炎血清抗体阳性；S/P在0.2～0.4之间，判为支原体肺炎血清抗体可疑。
1.2 流行病学调查
主要通过深入发病猪场和部分散养村组调查，以及与养殖场兽医、技术员和散养户群众电话、座谈等方法，对自然感染猪支原体肺炎的发病地区进行疫情来源及流行情况调查分析，包括发病的数量、年龄及感染率、发病率、病死率等内容，并根据疫病流行可能的传播途径和方式、猪群的饲养管理方法等，详细了解和掌握猪支原体肺炎流行的基本情况。
1.3 典型病例的临床诊断
选择临床症状比较典型的病例，观察其个体及群体发病的具体临床表现，如猪的体温，呼吸次数，早晚的呼吸咳嗽情况等，并进行详细的文字记录。
1.4 血清学诊断（酶联免疫吸附试验）
血清学抗体诊断用于监测猪群的健康状况，用已知特异性猪肺炎支原体抗原检测猪只血清中特异性抗体，通过比较动物不同年龄和不同生产周期血清中抗体效价的变化或特异性抗体有无，来判断是否存在病原体感染或检测免疫效果。经研究酶联免疫吸附试验是猪肺炎支原體血清学试验中抗体检测最敏感的试验方法，故本实验选择此方法进行鉴定[3]。
对未接种过猪肺炎支原体疫苗的种猪场，采集症状较明显的猪只血清进行酶联免疫吸附试验（ELISA）。
2 结果与分析
2.1 流行病学调查结果
笔者对海口市、文昌市、屯昌县的3个大型猪场和部分养殖户进行了猪支原体肺炎的流行病学资料调查，通过临床观察、病理剖检及血清学检测等方法确诊为猪支原体肺炎。
结果发现，不同年龄、品种和性别的猪都可能感染该病，育肥猪感染率在93.3%及以上。其中以哺乳仔猪和幼龄猪的发病率最高，高达62%和57%。其次是妊娠后期的母猪和哺乳母猪，发病率为28%，育肥猪和种猪、后备猪发病率最低，多呈隐性感染。不表现出明显的临床症状。但通过血清学检测可检测到阳性。
由于海南尤其海口附近地区的气候潮湿等原因，该病发病率相比其他地区更高。该病一年四季均有发生，尤其是在寒冷、多雨、潮湿及气候骤变时较为多见。此时的发病率会明显增高，甚至引起大批发病和急性死亡。特别是高密度饲养的集约化猪场，该病发生率更高，一旦发病，就会引起大面积传播，造成较大的经济损失。
2.2 临床特征
临床症状比较明显的病例主要是哺乳期仔猪，呈急性发作，表现为精神不振，头下垂，独立一隅或趴于地面，呼吸次数剧增至90次/min以上，病猪呼吸困难，严重者张口呼吸，并发出喘鸣音，呈明显的腹式呼吸。咳嗽次数少而低沉，偶尔会有痉挛性咳嗽的症状。
2.3 酶联免疫吸附试验结果
由表1可以看出，猪只在80日龄前感染猪肺炎支原体的比例相对较低，但是在育肥猪、公猪、母猪群感染却很普遍。几个猪场的母猪群均出现100%的感染率，说明该地区猪场感染猪肺炎支原体的比例较高[4]。由于本试验使用固相酶联免疫吸附试验（ELISA），只能定性检测猪血清中的猪肺炎支原体特异性抗体IgG，不能将母源抗体和感染抗体分开。所以推测哺乳仔猪可能在初乳中被动获得母源抗体。试验结果显示哺乳仔猪（20日龄内）的血清阳性率分别为55.6%和46.2%，随着日龄增长，母源抗体逐渐降低，所以检测到的血清阳性率也在逐步降低，到40日龄段达到最低（12.3%）。但随后由于受到周围病原体的感染，从50日龄开始检测到抗体水平开始明显提高，80日龄时达到68.3%，直至在母猪群中检测到100%的感染率。
3 小结与讨论
3.1 猪支原体肺炎的高感染率和母源抗体在哺乳阶段给与仔猪有效保护
从试验结果分析看出，育肥猪和母猪的感染率较高，母猪达到100%。说明猪支原体肺炎在该地区呈现高暴露。由于母猪的高感染率，导致初生仔猪被传染，甚至在整个猪群中传播并持续存在。由于母源抗体的影响，使哺乳仔猪暂时性获得抵抗力，但随着日龄增长，断奶后仔猪的抗体水平明显下降，此时，猪体由于受到周围支原体的感染而又逐步产生抗体，但在此阶段由于抗体水平增加速度有限，如果环境或饲养条件突然改变，很可能导致机体被肺炎支原体侵袭，该阶段猪的发病率和死亡率相对其他阶段明显升高。随着日龄增加抗体水平不断提高，在育肥阶段抗体水平达到93.3%，但后期阶段猪的发病率和死亡率又开始下降[5，6]。
3.2 猪肺炎支原体疫苗免疫接种不容忽视
本试验采集的从10日龄到母猪不同阶段猪的血清，抽檢发现猪肺炎支原体的感染情况在50日龄后随着日龄增加逐步加重。说明海口市附近地区的猪场猪肺炎支原体感染的情况较为严重，尤其是母猪的感染情况最为严重，也是导致猪群大面积继发感染其他呼吸道疫病的根源[7]，给其他呼吸道疾病如猪肺疫、猪传染性胸膜肺炎及蓝耳病等的防治增加了难度。
部分养殖户认为猪肺炎支原体疫苗不能显著减少猪群的感染率[8，9]，且因为抗体维持时间短、该病的死亡率较低等原因，不进行猪肺炎支原体疫苗的接种，一旦发病，采用泰乐菌素、替米考星等药物进行治疗以及隔离饲养的方法来解决，但效果并不明显。有研究表明，虽然疫苗不能很有效地阻止猪群感染，但是能有效减少肺炎支原体在呼吸道和肺部的定殖，从而降低猪群感染其他呼吸道疾病的风险。所以，在一些发病率较高的猪场，建议进行猪肺炎支原体疫苗的免疫接种，同时注意猪舍的通风，环境温度、湿度的控制，定期消毒，以及制定合理的饲养管理制度，及时处理阳性猪，对该病的控制可起到较好的效果。
参考文献：
[1] 邢福珊，王韦华，张彦明，等，猪支原体肺炎的流行病学调查及病理学诊断[J].西北农业学报，2009，18（5）：67-70.
[2] 王 华，张 清，王君玮，等.猪支原体肺炎流行病学和诊断技术研究进展[J].动物医学进展，2009，30（9）：73-77.
[3] 万庆文，谢王韵，温贤诚，等.广东东莞地区猪肺炎支原体感染的血清学调查[J].中国畜禽种业，2011（3）：95-96.
[4] 邱美珍，傅胜才，王 慧，等.规模化商品扩繁猪场支原体肺炎血清学调查[J].养猪，2013（3）：94-95.
[5] 冯志新，邵国清，刘茂军，等.猪支原体肺炎防治研究进展[J].现代生物医学进展，2008，8（11）：2143-2145.
[6] 李莹莹，何 颖，赵 武，等，猪支原体的研究进展[J].动物医学进展，2013，34（10）：95-100.
[7] CLARK L，FREEMAN M，SCHEIDT A，et al. Investigating the transmission of Mycoplasma hyopneumoniae in a swine herd with enzootic pneumonia[J].Vet Med，1991，86：543-550.
[8] 秦先文，伍少钦，于 博，等.接种猪肺炎支原体疫苗后抗体水平变化规律的研究[J].动物医学进展，2008，29（3）：36-39.
[9] MEYNS T，DEWULF J，DE KRUIF A，et al.Comparison of transmission of Mycoplasma hyopeumoniae in vaccinated and non—vacci—nated populations[J].Vaccine，2006，24（49-50）：7081-7086.
由表1可以看出，猪只在80日龄前感染猪肺炎支原体的比例相对较低，但是在育肥猪、公猪、母猪群感染却很普遍。几个猪场的母猪群均出现100%的感染率，说明该地区猪场感染猪肺炎支原体的比例较高[4]。由于本试验使用固相酶联免疫吸附试验（ELISA），只能定性检测猪血清中的猪肺炎支原体特异性抗体IgG，不能将母源抗体和感染抗体分开。所以推测哺乳仔猪可能在初乳中被动获得母源抗体。试验结果显示哺乳仔猪（20日龄内）的血清阳性率分别为55.6%和46.2%，随着日龄增长，母源抗体逐渐降低，所以检测到的血清阳性率也在逐步降低，到40日龄段达到最低（12.3%）。但随后由于受到周围病原体的感染，从50日龄开始检测到抗体水平开始明显提高，80日龄时达到68.3%，直至在母猪群中检测到100%的感染率。
3 小结与讨论
3.1 猪支原体肺炎的高感染率和母源抗体在哺乳阶段给与仔猪有效保护
从试验结果分析看出，育肥猪和母猪的感染率较高，母猪达到100%。说明猪支原体肺炎在该地区呈现高暴露。由于母猪的高感染率，导致初生仔猪被传染，甚至在整个猪群中传播并持续存在。由于母源抗体的影响，使哺乳仔猪暂时性获得抵抗力，但随着日龄增长，断奶后仔猪的抗体水平明显下降，此时，猪体由于受到周围支原体的感染而又逐步产生抗体，但在此阶段由于抗体水平增加速度有限，如果环境或饲养条件突然改变，很可能导致机体被肺炎支原体侵袭，该阶段猪的发病率和死亡率相对其他阶段明显升高。随着日龄增加抗体水平不断提高，在育肥阶段抗体水平达到93.3%，但后期阶段猪的发病率和死亡率又开始下降[5，6]。
3.2 猪肺炎支原体疫苗免疫接种不容忽视
本试验采集的从10日龄到母猪不同阶段猪的血清，抽檢发现猪肺炎支原体的感染情况在50日龄后随着日龄增加逐步加重。说明海口市附近地区的猪场猪肺炎支原体感染的情况较为严重，尤其是母猪的感染情况最为严重，也是导致猪群大面积继发感染其他呼吸道疫病的根源[7]，给其他呼吸道疾病如猪肺疫、猪传染性胸膜肺炎及蓝耳病等的防治增加了难度。
部分养殖户认为猪肺炎支原体疫苗不能显著减少猪群的感染率[8，9]，且因为抗体维持时间短、该病的死亡率较低等原因，不进行猪肺炎支原体疫苗的接种，一旦发病，采用泰乐菌素、替米考星等药物进行治疗以及隔离饲养的方法来解决，但效果并不明显。有研究表明，虽然疫苗不能很有效地阻止猪群感染，但是能有效减少肺炎支原体在呼吸道和肺部的定殖，从而降低猪群感染其他呼吸道疾病的风险。所以，在一些发病率较高的猪场，建议进行猪肺炎支原体疫苗的免疫接种，同时注意猪舍的通风，环境温度、湿度的控制，定期消毒，以及制定合理的饲养管理制度，及时处理阳性猪，对该病的控制可起到较好的效果。
参考文献：
[1] 邢福珊，王韦华，张彦明，等，猪支原体肺炎的流行病学调查及病理学诊断[J].西北农业学报，2009，18（5）：67-70.
[2] 王 华，张 清，王君玮，等.猪支原体肺炎流行病学和诊断技术研究进展[J].动物医学进展，2009，30（9）：73-77.
[3] 万庆文，谢王韵，温贤诚，等.广东东莞地区猪肺炎支原体感染的血清学调查[J].中国畜禽种业，2011（3）：95-96.
[4] 邱美珍，傅胜才，王 慧，等.规模化商品扩繁猪场支原体肺炎血清学调查[J].养猪，2013（3）：94-95.
[5] 冯志新，邵国清，刘茂军，等.猪支原体肺炎防治研究进展[J].现代生物医学进展，2008，8（11）：2143-2145.
[6] 李莹莹，何 颖，赵 武，等，猪支原体的研究进展[J].动物医学进展，2013，34（10）：95-100.
[7] CLARK L，FREEMAN M，SCHEIDT A，et al. Investigating the transmission of Mycoplasma hyopneumoniae in a swine herd with enzootic pneumonia[J].Vet Med，1991，86：543-550.
[8] 秦先文，伍少钦，于 博，等.接种猪肺炎支原体疫苗后抗体水平变化规律的研究[J].动物医学进展，2008，29（3）：36-39.
[9] MEYNS T，DEWULF J，DE KRUIF A，et al.Comparison of transmission of Mycoplasma hyopeumoniae in vaccinated and non—vacci—nated populations[J].Vaccine，2006，24（49-50）：7081-7086.
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